ულტრაფილტრაციის ცენტრიფუგის მილის გამოყენება და სიფრთხილის ზომები
1) აირჩიეთ შესაფერისი ულტრაფილტრაციის მილი.გაითვალისწინეთ, რომ UF მემბრანები განსხვავდება სხვადასხვა ქიმიკატების მიმართ ტოლერანტობის დონით.როგორც წესი, ულტრაფილტრაციის მილები 10 kDa მოლეკულური წონის წყვეტით შეიძლება შეირჩეს მოლეკულური წონის წყვეტით, რომელიც არ უნდა იყოს ინტერესის ცილის მოლეკულური წონის 1/3-ზე მეტი, როგორიცაა 35 kDa.თუ საინტერესო ცილის მოლეკულური წონა არის დაახლოებით 10 კდ, შეიძლება გამოყენებულ იქნას ულტრაფილტრაციის მილი 3 კდ მოლეკულური მასით.
(2) ულტრაფილტრაცია, ახლად შეძენილი, მშრალია, გამოყენებამდე ემატება ულტრასუფთა წყალი და წყალი მთლიანად გადის მემბრანაში, ყინულის აბაზანაში ან მაცივარში წინასწარ გაცივებული რამდენიმე წუთის განმავლობაში.შემდეგ ასხამენ წყალს, ანუ ცილოვან სითხეს და რამდენს ემატება, რომელი არ იყოს თეთრ ხაზზე მეტი მილის ზედა ნაწილში.ოპერაცია მსუბუქია და ცილის ხსნარის დამატებამდე საჭიროა ულტრაფილტრაციის მილი წინასწარ გაცივდეს ყინულზე.
3) მასაც და სიმძიმის ცენტრმაც უნდა მიაღწიოს წონასწორობას.გაითვალისწინეთ, რომ ბრუნვის სიჩქარე და აჩქარება არ არის ძალიან სწრაფი, წინააღმდეგ შემთხვევაში პირდაპირ აზიანებს ულტრაფილტრაციის მემბრანას.დაიწყო ცენტრიფუგა ულტრაფილტრაცია (ცენტრიფუგა წინასწარ გაცივებული 4 გრადუსამდე).მას შემდეგ, რაც სხვადასხვა ცენტრიფუგების RPM გადაკეთდა გ-ად, ის განსხვავებული იყო.ცენტრიფუგის აჩქარება დარეგულირდა მინიმუმამდე, რაც ამცირებს წნევას მემბრანაზე.გაითვალისწინეთ, დარწმუნდით, რომ დატოვეთ ცენტრიფუგა მას შემდეგ, რაც ცენტრიფუგა მიაღწევს დანიშნულების სიჩქარეს, ან თუ პრობლემა გაქვთ, პირველად ვერ უმკლავდებით მას.მემბრანის ორიენტაცია ღერძზე დარეგულირდა ინსტრუქციის მიხედვით (კუთხური ცენტრიფუგის კორპუსი არის მემბრანა ღერძამდე პერპენდიკულარულად).პრაქტიკული გამოყენებისას, ბრუნვის ზოგადი სიჩქარე უფრო დაბალია, ვიდრე ინსტრუქციებში, ასე რომ, ცენტრიფუგის მილის სიცოცხლე შეიძლება გაგრძელდეს.
3) მასაც და სიმძიმის ცენტრმაც უნდა მიაღწიოს წონასწორობას.გაითვალისწინეთ, რომ ბრუნვის სიჩქარე და აჩქარება არ არის ძალიან სწრაფი, წინააღმდეგ შემთხვევაში პირდაპირ აზიანებს ულტრაფილტრაციის მემბრანას.დაიწყო ცენტრიფუგა ულტრაფილტრაცია (ცენტრიფუგა წინასწარ გაცივდა 4 გრადუსამდე).მას შემდეგ, რაც სხვადასხვა ცენტრიფუგების RPM გადაკეთდა გ-ად, ის განსხვავებული იყო.ცენტრიფუგის აჩქარება დარეგულირდა მინიმუმამდე, რაც ამცირებს წნევას მემბრანაზე.გაითვალისწინეთ, დარწმუნდით, რომ დატოვეთ ცენტრიფუგა მას შემდეგ, რაც ცენტრიფუგა მიაღწევს დანიშნულების სიჩქარეს, ან თუ პრობლემა გაქვთ, პირველად ვერ უმკლავდებით მას.მემბრანის ორიენტაცია ღერძზე დარეგულირდა ინსტრუქციის მიხედვით (კუთხური ცენტრიფუგის კორპუსი არის მემბრანა ღერძის პერპენდიკულარულად).პრაქტიკული გამოყენებისას, ბრუნვის ზოგადი სიჩქარე უფრო დაბალია, ვიდრე ინსტრუქციებში, ასე რომ, ცენტრიფუგის მილის სიცოცხლე შეიძლება გაგრძელდეს.
(4) როდესაც კონცენტრირდება დარჩენილ 1 მლ-ზე, აიღეთ 50 მლ ბუფერული ხსნარი, დაამატეთ 10 მლ ნაკადი და შეამოწმეთ არის თუ არა რაიმე ლურჯი ფერი, რათა დადგინდეს, აკლია თუ არა ულტრაფილტრაციის მილს ცილა.თუ მილის გაჟონვაა, ხელახლა დაასხით ზედა ფენა და გადაიტანეთ ახალ მილში ულტრაფილტრაციის დასაწყებად.ზუსტად იმის დასადგენად, გამოტოვებულია თუ არა მილები, ცენტრიფუგა 10 წუთის განმავლობაში 5მგლ BSA-ით გადინების წინ, პროტეინის წებოზე ან ბრედფორდის ნედლი ანალიზით და გააგრძელეთ დარჩენილი კონცენტრირებული ცილის ხსნარის დამატებით (რომელიც მოქმედებს ყინულზე და ხელს უშლის ცილების გაცხელებას). დამატებულია მთელი კონცენტრატი.იზრუნეთ ცენტრიფუგაციის დროს, თუ მოხდება ცილების დალექვა, რაც იწვევს მილის დახურვას.თუ ნალექი მოხდა, დაადგინეთ ნალექის კონკრეტული მიზეზი არის ცილის გადაჭარბებული კონცენტრაცია თუ შეუსაბამო ბუფერი;პირველი შეიძლება მოგვარდეს რამდენიმე ულტრაფილტრაციის მილების ერთდროულად ულტრაფილტრაციით, კონცენტრაციის შემცირებით, ხოლო მეორეს სხვადასხვა ბუფერული ხსნარების გაცვლით, სანამ ცილის დალექვა არ მოხდება.
(4) როდესაც კონცენტრირდება დარჩენილ 1 მლ-ზე, აიღეთ 50 მლ ბუფერული ხსნარი, დაამატეთ 10 მლ ნაკადი და შეამოწმეთ არის თუ არა რაიმე ლურჯი ფერი, რათა დადგინდეს, აკლია თუ არა ულტრაფილტრაციის მილს ცილა.თუ მილის გაჟონვაა, ხელახლა დაასხით ზედა ფენა და გადაიტანეთ ახალ მილში ულტრაფილტრაციის დასაწყებად.ზუსტად იმის დასადგენად, გამოტოვებულია თუ არა მილები, ცენტრიფუგა 10 წუთის განმავლობაში 5მგლ BSA-ით გადინების წინ, პროტეინის წებოზე ან ბრედფორდის ნედლი ანალიზით და გააგრძელეთ დარჩენილი კონცენტრირებული ცილის ხსნარის დამატებით (რომელიც მოქმედებს ყინულზე და ხელს უშლის ცილების გაცხელებას). დამატებულია მთელი კონცენტრატი.იზრუნეთ ცენტრიფუგაციის დროს, თუ მოხდება ცილების დალექვა, რაც იწვევს მილის დახურვას.თუ ნალექი მოხდა, დაადგინეთ ნალექის კონკრეტული მიზეზი არის ცილის გადაჭარბებული კონცენტრაცია თუ შეუსაბამო ბუფერი;პირველი შეიძლება მოგვარდეს რამდენიმე ულტრაფილტრაციის მილების ერთდროულად ულტრაფილტრაციით, კონცენტრაციის შემცირებით, ხოლო მეორეს სხვადასხვა ბუფერული ხსნარების გაცვლით, სანამ ცილის დალექვა არ მოხდება.
(5) პირველი რამდენიმე საფეხური გამოიყენება ცილის კონცენტრირებისთვის და თუ ბუფერი უნდა შეიცვალოს, ნაზად დაამატეთ ახალი ბუფერი (ულტრაფილტრაცია 0.22 მმ ულტრაფილტრაციის მემბრანის მეშვეობით) დაახლოებით 1 მლ მთლიან პროტეინს და ხელახლა კონცენტრირება დაახლოებით 1 მლ-მდე სამისთვის. ზედიზედ ჯერ, საბოლოო კონცენტრირებული საბოლოო მოცულობა დამოკიდებულია ცილის სასურველ კონცენტრაციაზე, ზოგადად არაუმეტეს 500 მლ, არამედ 200 მლ-ის ფარგლებში.მიაღწიეთ 1000 × ან მეტს სამჯერ, არსებითად იმდენივე ბუფერული ცვლილება, რაც გამოითვლება ყოველ ჯერზე მინიმუმ 10× ან მეტი მოცულობის გამდიდრებით.
(5) პირველი რამდენიმე საფეხური გამოიყენება ცილის კონცენტრირებისთვის და თუ ბუფერი უნდა შეიცვალოს, ნაზად დაამატეთ ახალი ბუფერი (ულტრაფილტრაცია 0.22 მმ ულტრაფილტრაციის მემბრანის მეშვეობით) დაახლოებით 1 მლ მთლიან პროტეინს და ხელახლა კონცენტრირება დაახლოებით 1 მლ-მდე სამისთვის. ზედიზედ ჯერ, საბოლოო კონცენტრირებული საბოლოო მოცულობა დამოკიდებულია ცილის სასურველ კონცენტრაციაზე, ზოგადად არაუმეტეს 500 მლ, არამედ 200 მლ-ის ფარგლებში.მიაღწიეთ 1000 × ან მეტს სამჯერ, არსებითად იმდენივე ბუფერული ცვლილება, რაც გამოითვლება ყოველ ჯერზე მინიმუმ 10× ან მეტი მოცულობის გამდიდრებით.
გამოქვეყნების დრო: ნოე-09-2022