რამდენიმე ფერმენტი, რომელიც ჩვეულებრივ გამოიყენება PCR ექსპერიმენტებში

პოლიმერაზული ჯაჭვური რეაქცია, შემოკლებით როგორცPCRინგლისურად, არის მოლეკულური ბიოლოგიის ტექნიკა, რომელიც გამოიყენება დნმ-ის კონკრეტული ფრაგმენტების გასაძლიერებლად.ის შეიძლება ჩაითვალოს, როგორც სპეციალური დნმ-ის რეპლიკაცია სხეულის გარეთ, რამაც შეიძლება მნიშვნელოვნად გაზარდოს დნმ-ის ძალიან მცირე რაოდენობა.მთელი განმავლობაშიPCRრეაქციის პროცესში მნიშვნელოვან როლს ასრულებს ნივთიერებების ერთი კლასი - ფერმენტები.

1. Taq დნმ

ექსპერიმენტებში ადრეულ დღეებშიPCRმეცნიერებმა გამოიყენეს Escherichia coli დნმ პოლიმერაზა I, მაგრამ ამ ფერმენტს აქვს პრობლემა: მას სჭირდება ახალი ფერმენტის შევსება ყოველ ჯერზე ციკლის შესრულებისას, რაც ოპერაციის ეტაპებს ოდნავ ართულებს და ძნელია სრულად ავტომატურად გაძლიერდეს.ეს პრობლემა მოგვარდა მას შემდეგ, რაც 1988 წელს მეცნიერებმა შემთხვევით გამოიღეს Taq დნმ პოლიმერაზა Thermus aquaticus-დან. მას შემდეგ დნმ-ის ავტომატური გაძლიერება რეალობად იქცა.ამ ფერმენტის აღმოჩენაც ხდისPCRტექნოლოგია მოსახერხებელი, პრაქტიკული და უნივერსალური ტექნოლოგიაა.ამჟამად, Taq დნმ პოლიმერაზა არის ყველაზე გავრცელებული პოლიმერაზა დნმ-ის კომპლექტებში.

2. PfuDNA

როგორც ზემოთ აღინიშნა, Taq DNase-ს აქვს დიდი ხარვეზი, ამიტომ მეცნიერებმა შეცვალეს Taq დნმ პოლიმერაზა გარკვეულწილად, რათა თავიდან აიცილონ არასპეციფიკური გაძლიერება შეუსაბამობის გამო, რაც გამოიწვევს ტესტის არაზუსტ შედეგებს.მაგრამ Taq დნმ პოლიმერაზას მოდიფიკაციამ შეიძლება შეაფერხოს დნმ პოლიმერაზას აქტივობა ოთახის ტემპერატურაზე.PfuDNA პოლიმერაზას კარგად შეუძლია შეავსოს Taq დნმ პოლიმერაზას ზემოაღნიშნული უარყოფითი მხარეები, რათა PCR რეაქცია ნორმალურად განხორციელდეს და სამიზნე გენის ამპლიფიკაციის წარმატების მაჩვენებელი შეიძლება ეფექტურად გაუმჯობესდეს.

3. საპირისპირო ტრანსკრიპტაზა

საპირისპირო ტრანსკრიპტაზა აღმოაჩინეს 1970 წელს. ეს ფერმენტი იყენებს რნმ-ს, როგორც შაბლონს, dNTP-ს, როგორც სუბსტრატს, მიჰყვება ბაზის დაწყვილების პრინციპს და ასინთეზებს დნმ-ის ერთჯაჭვიან რნმ-ის შაბლონს 5'-3' მიმართულებით.საპირისპირო ტრანსკრიპტაზა ძირითადად დამოკიდებულია დნმ-ის პოლიმერაზას აქტივობაზე დნმ-ის ან რნმ-ის შაბლონებიდან და, შესაბამისად, არ გააჩნია 3'-5' ეგზონუკლეაზას აქტივობა.თუმცა, მას აქვს RNase H აქტივობა, რაც გარკვეულწილად ზღუდავს საპირისპირო ტრანსკრიპტაზის სინთეზის ხანგრძლივობას.ველური საპირისპირო ტრანსკრიპტაზის დაბალი ერთგულებისა და თერმოსტაბილურობის გამო, მეცნიერებმა ასევე შეცვალეს იგი.

ამისთვისPCRექსპერიმენტები, ძირითადი სახარჯო მასალებია: ინდივიდუალური PCR მილი, 4/8 ზოლიანი PCR მილი, PCR ფირფიტები.

ლაბიოსPCR სახარჯო მასალებიაქვს შემდეგიუპირატესობები:

PCR ფირფიტები: ფართო თერმოციკლერის თავსებადობა;მაღალი კონტრასტული, მარტივი კარგად ამოცნობა;კარგად fluorescence არეკვლა;კარგისითბოს გადაცემა;სერტიფიცირებული DNase, RNase, დნმ, PCR ინჰიბიტორები და ტესტირება პიროგენისგან თავისუფალი.

ინდივიდუალური PCR მილები: აორთქლებისადმი მდგრადი; კარგისითბოს გადაცემა;შესანიშნავი ოპტიკური სიცხადე; სერტიფიცირებული DNase, RNase, დნმ, PCR ინჰიბიტორები და გამოცდილი პიროგენისგან თავისუფალი.

4/8 ზოლიანი PCR მილები: ულტრა თხელი კედლები;მაღალი სიცხადე;კარგი ფლუორესცენტური არეკვლა;შეიძლება გამოყენებულ იქნას ფარმაცევტულ ინდუსტრიაში, კვების მრეწველობაში და მოლეკულურ ბიოლოგიაში; მაღალი ხარისხის, ხელუხლებელი PP მასალა; სერტიფიცირებული DNase, RNase, დნმ, PCR ინჰიბიტორები და ტესტირება პიროგენისგან თავისუფალი.